流式胞内染色步骤

（使用FIX & PERM固定破膜）

制备好细胞悬液，取100ul

（全血样本：人100ul，小鼠30~50ul）

染表面抗体，室温避光孵育15min，不用洗涤

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加入FIX&PERM Reagent A 100ul室温孵育15min

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加入3ml流式染色缓冲液（Flow Cytometry Staining Buffer）

300g 离心5min 弃上清收集细胞

液体尽量倒干净，不要残留

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涡旋混匀沉淀，加入FIX&PERM Reagent B

100ul和胞内抗体

（同型对照管加入同等剂量的抗体）

混匀，室温避光孵育20min

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加入3ml流式染色缓冲液，300g离心5min弃上清收集细胞

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用0.5ml 流式染色缓冲液重悬后立即上机。

或者加入0.5ml 0.1~4%多聚甲醛避光4℃保存24小时内上机分析